一、产品简介
本产品包含高纯度Taq DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系,浓度为2×,只需要添加引物、模板和dd水即可进行PCR扩增,可有效扩增3kb以内的DNA片段。体系中包含有蓝色电泳指示剂,可在扩增完成后直接上样进行电泳检测,其迁移速度在1%TAE琼脂糖凝胶中与500bp双链DNA片段相近。
使用本产品扩增的PCR产物3’端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA克隆。
二、产品特点
操作简单:2×Mix,只需要添加引物、模板和dd水即可进行PCR扩增;
极快的延伸速度:10~15s/kb。
三、适用范围
适用于常规PCR扩增。
-20℃保存24个月,短期内多次使用可置于4℃保存。
1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板;
2) 模板浓度过低。适当增加模板用量;
3) 引物不合适。优化引物设计;
4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度;
5) 循环数过少。适当增加5~10个循环;
6) 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至20~30 s/kb。
1) 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增;
2) 引物浓度过高。降低引物浓度;
3) 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板;
4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序;
5) 循环数过多。减少循环数至25~30 cycles。
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