染色概述
富尔根染色是一种特异性检测细胞核DNA的组织化学方法,主要基于DNA与Schiff试剂的反应。该染色方法能精准地标记细胞核,并常用于染色体研究、肿瘤组织学分析以及DNA含量的定量测定。
染色原理
富尔根染色基于DNA分子中的脱氧核糖在盐酸作用下脱水形成醛基,随后与Schiff试剂中的亚硫酸品红发生反应,生成紫红色或洋红色复合物,从而对DNA进行显色。RNA因缺乏脱氧核糖,不会被染色,因此该方法能够特异性地检测DNA。染色后,细胞核呈紫红色,而细胞质保持无色或背景染色较浅。
染色特点
DNA特异性强:仅染色DNA,不会与RNA发生交叉反应。
染色结果稳定:核DNA呈现稳定的紫红色,对比度清晰。
可用于定量分析:适用于DNA含量的测定,如细胞周期分析和肿瘤组织学研究。
适用范围广:可应用于不同类型的组织和细胞,包括病理学、遗传学和发育生物学研究。
应用领域
细胞遗传学分析,如染色体研究和细胞周期检测。
肿瘤病理学检测DNA含量变化,辅助癌症分级诊断。
细胞分裂与增殖研究,如研究细胞周期中DNA合成阶段(S期)的特征。
组织病理学和核形态学研究,评估细胞核的结构完整性。
样本可为石蜡切片或冰冻切片,需保证组织结构完整,细胞核清晰可见。推荐使用4% PFA固定,固定时间一般为12-24小时,避免过度固定影响染色效果。石蜡切片厚度建议为4-6 μm,冰冻切片厚度建议为8-12 μm。样本应避免使用醇类固定剂,以免影响DNA的完整性,从而降低染色特异性。
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