一、骨组织脱钙简介:骨组织脱钙是组织学研究的重要步骤,旨在去除骨基质中的矿物质,使组织适合切片、染色及后续分析。慢脱法通常采用EDTA脱钙液(如RG-TG-01),其温和的作用机制有助于保持组织的完整性,减少细胞成分损伤。
二、慢脱法的优势:相比于酸脱钙,EDTA脱钙能更好地保护组织蛋白和核酸,避免染色过度或抗原丢失,因此在免疫组化、原位杂交及分子生物学研究中应用广泛。虽然脱钙时间较长,但其效果更适用于精细研究,尤其是在骨髓、软骨及肿瘤病理研究中。
三、应用以及注意事项:使用EDTA脱钙液时,建议维持适宜pH并定期更换溶液,以保持脱钙效率。脱钙过程中可结合X射线或组织切片检测评估进度,确保组织质量符合实验需求。
四、脱钙时间(仅供参考)
4.1 小鼠(Mouse)
股骨、胫骨(≤5mm厚):2-3周
颅骨、下颌骨(≤3mm厚):1-2周
椎骨(单块)(≤4mm厚):2-3周
脊柱(整段):4-6周
尾椎(单节):1-2周;(整段):3-4周
膝关节、髋关节(带软骨):3-4周
长骨(未成骨化胚胎组织):3-5天
4.2 大鼠(Rat)
股骨、胫骨(≤5mm厚):3-4周
颅骨、下颌骨(≤3mm厚):2-3周
椎骨(单块)(≤4mm厚):3-4周
脊柱(整段):5-7周
尾椎(单节):2-3周;(整段):4-5周
膝关节、髋关节(带软骨):4-5周
长骨(未成骨化胚胎组织):5-7天
组织大小:建议骨组织厚度≤5mm,以确保脱钙均匀,避免脱钙不完全影响切片质量。
固定处理:样本应先使用4%多聚甲醛(RG-GD-01)固定24-48小时,以维持组织结构和细胞形态。
脱钙前冲洗:固定后需用PBS或蒸馏水充分冲洗,以去除残留固定液,减少对脱钙过程的干扰。
脱钙液比例:组织与EDTA脱钙液的体积比建议≥1:20,并定期更换新鲜溶液,以保证脱钙效率。
物理法:用细针轻轻刺入组织,如针可顺利穿透且无阻力,表明脱钙充分。
由于不同组织的密度、矿化程度及结构特性各异,其处理方式存在差异,因此脱钙时间也有所不同。具体脱钙时间需根据实验需求及组织特点灵活调整,并在每次实验中结合实际情况进行计算和评估,以确保最佳脱钙效果。
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