冰冻切片是一种用于快速制备组织切片的方法,能够最大程度地保留组织中的蛋白、核酸及细胞结构,适用于免疫荧光染色、酶组织化学、原位杂交(ISH)等实验。相比于石蜡切片,冰冻切片无需经历脱水、透明、石蜡包埋等步骤,能够较好地保持组织的原始状态,尤其适用于分析生物大分子活性和脂质成分。
在制备冰冻切片时,通常使用OCT(Optimal Cutting Temperature)包埋剂包裹组织,以提供适当的支撑,使组织在低温下保持稳定的结构。切片厚度一般控制在16-30μm,以确保切片既能保持组织完整性,又能提供良好的显微观察效果。由于冰冻切片的制备过程中涉及低温环境,需在-20℃至-30℃的冷冻切片机(冰冻微切器)中进行切割,并在玻片上进行快速固定,以防止组织结构发生改变。
组织需新鲜取材,避免因降解影响实验结果。
组织应尽快进行冰冻固定,推荐使用液氮速冻或干冰-异丙醇冷冻,以减少冰晶形成对组织结构的损伤。
使用OCT包埋剂包埋组织,使其在低温下保持稳定,以便于切片操作
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